l 細胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

該細胞來源于德國DSMZ（German collection of microorganisms and cell cultures），源于C57BL/6小鼠小膠質(zhì)細胞，表達核v-myc、染色體v-raf癌基因，表面表達envgp70抗原，在形態(tài)學、表型及功能上有吞噬細胞的特征。 免疫組化結(jié)果顯示細胞為MAC1,MAC2陽性，而MAC3，膠質(zhì)細胞原纖維酸性蛋白，半乳糖腦苷脂為陰性。

l 細胞特性

1） 來源：小鼠腦

2） 形態(tài)：上皮細胞樣 松散貼壁，懸浮和貼壁細胞混合生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準備 DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (推薦：awcell-0001)          87%

    優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                                               10%

    GlutaMAX-1谷氨酰胺    (推薦：awcell-0900 )       1%

    HEPES 1M Buffer solution  (推薦：awcell-01200)  1%

    P/S青霉素-鏈霉素                                                                      1%.

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

l 注意事項：

小鼠小膠質(zhì)BV2細胞該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。