成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織中最常見(jiàn)而且數(shù)量較多的一種細(xì)胞，位于膠原纖維近旁并依附于其上。此細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)可隨其功能狀態(tài)的不同而改變。在功能活動(dòng)旺盛時(shí)，成纖維細(xì)胞的胞體較大，呈扁平星形，有突起。胞核呈卵圓形，核染色質(zhì)較少，著色淺，核仁明顯。胞質(zhì)較多，弱鹼性，內(nèi)含豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核蛋白體、高爾基復(fù)合體以及微絲和微管等結(jié)構(gòu)，表明此種細(xì)胞具有合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和多糖蛋白，形成膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維和基質(zhì)的作用。在相對(duì)靜止或功能活動(dòng)不活躍時(shí)的細(xì)胞，稱(chēng)為纖維細(xì)胞。這種細(xì)胞比成纖維細(xì)胞小，輪廓不甚清楚，多呈梭形。胞質(zhì)少，弱嗜酸性，其中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體及其它細(xì)胞器均不發(fā)達(dá)。這表明纖維細(xì)胞是功能活動(dòng)不活躍的細(xì)胞。但在一定條件下，如創(chuàng)傷修復(fù)，結(jié)締組織再生時(shí)，纖維細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為功能活躍的成纖維細(xì)胞，積極參與合成和分泌蛋白質(zhì)，形成纖維和基質(zhì)。簡(jiǎn)便快速分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞對(duì)是否能在體外成功建立模擬腫瘤微環(huán)境具有重要意義。

小鼠成纖維細(xì)胞組織塊培養(yǎng)法：

　　1)小鼠成纖維細(xì)胞組織塊培養(yǎng)法在已有文獻(xiàn)基礎(chǔ)上優(yōu)化進(jìn)行。將剛出生的小鼠處死，75%酒精浸泡消毒后，放入生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。先取其背部皮膚，放入75%酒精中浸泡消毒，以無(wú)Ca2+、Mg2+PBS漂洗皮膚。其次，將皮膚剪成1mm2大小，均勻平貼于無(wú)菌平皿中，加入適量DEME*培養(yǎng)基，37℃、5%CO2培養(yǎng)24h，使皮膚能夠牢固平貼于平皿上。24h后再加入足量的培養(yǎng)基37℃、5%CO2培養(yǎng)，1周后將組織塊去除，即可見(jiàn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)（在這1周內(nèi)除了中間換1次培養(yǎng)基，盡量勿動(dòng)培養(yǎng)平皿）。此后，每2天換1次培養(yǎng)液，8~10d后可見(jiàn)細(xì)胞鋪滿(mǎn)皿底，消化傳代。

　　2)成纖維細(xì)胞傳代

　　當(dāng)去組織塊后的成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)平皿中長(zhǎng)成片可傳代時(shí)，吸去舊培養(yǎng)液，用無(wú)Ca2+、Mg2+PBS漂洗1次，加入0.05%胰蛋白酶，覆蓋皿底細(xì)胞，在室溫下輕輕吹打。將平皿在倒置顯微鏡下觀察，消化5min左右后，發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞變圓時(shí)，立即加入等體積的DEME*培養(yǎng)基終止胰酶反應(yīng)，用吸管輕輕吹打，吹打結(jié)束后，將細(xì)胞懸液移入離心管，1200r/min離心8min，棄上清液后加入DEME*培養(yǎng)液，吹散混勻按1∶2濃度傳代，以后每2~3天傳代1次。