小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3-E1能夠特異性表達(dá)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Runx-2和堿性磷酸酶等早期成骨分化表型標(biāo)志物,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于成骨分化的研究中。成骨細(xì)胞的來源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外組織。及人的胚胎顱骨或新生動(dòng)物的顱骨為成骨細(xì)胞的常用來源。

　　小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3-E1的培養(yǎng)操作步驟：

　　1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

　　2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

　　3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30厘米處照射2-3小時(shí)；

　　4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

　　5．將培養(yǎng)板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

　　小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3-E1的注意要點(diǎn)：

　　1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

　　2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

　　3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

　　4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

　　5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。