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小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的特性及處理方法

更新時(shí)間:2022-01-21  |  點(diǎn)擊率:3883
  小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞中體積大的一種。用經(jīng)典的金屬浸鍍技術(shù)(銀染色)顯示此類(lèi)膠質(zhì)細(xì)胞呈星形,從胞體發(fā)出許多長(zhǎng)而分支的突起,伸展充填在神經(jīng)細(xì)胞的胞體及其突起之間,起支持和分隔神經(jīng)細(xì)胞的作用。
  纖維性星形膠質(zhì)細(xì)胞多分布在腦脊髓的皮質(zhì),突起細(xì)長(zhǎng),分支較少,胞質(zhì)中含,多分布在灰質(zhì),細(xì)胞突起粗短,分支多。胞質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)絲較少,又稱(chēng)苔狀細(xì)胞。電鏡下星形膠質(zhì)細(xì)胞的胞核有缺失,胞質(zhì)較清亮,游離核糖核蛋白體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均很少,糖原顆粒豐富,有大量的膠質(zhì)絲。纖維形星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起呈長(zhǎng)圓柱形,而原漿性星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起呈薄片狀,并常包裹著神經(jīng)細(xì)胞及其突觸。星形膠質(zhì)細(xì)胞的腳板與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間相隔一層基板,腳板質(zhì)膜與基板接觸處有半橋粒結(jié)構(gòu)。
  小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的特性:
  1、組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腦組織。
  2、細(xì)胞鑒定:神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法。
  3、經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
  4、不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
  5、細(xì)胞生長(zhǎng)方式:星狀細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
  細(xì)胞處理:
  1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
  2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
  3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
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