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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF

簡(jiǎn)要描述:小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF取孕9天的615小鼠胚胎,去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細(xì)胞可用作飼養(yǎng)層細(xì)胞,支持胚胎干細(xì)胞ES的生長(zhǎng)并維持ES未分化的狀態(tài)。當(dāng)作為飼養(yǎng)層細(xì)胞時(shí),MEF需經(jīng)絲裂mei素C處理停止生長(zhǎng)。建議作為ES細(xì)胞的飼養(yǎng)層時(shí),MEF不要超過(guò)6代。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-08-28
  • 訪  問(wèn)  量: 574

詳細(xì)介紹

應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF 種屬鑒定 安為生物

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF

MEF【MEF】

l 細(xì)胞鑒定

種屬鑒定已通過(guò)

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

取孕9天的615小鼠胚胎,去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細(xì)胞可用作飼養(yǎng)層細(xì)胞,支持胚胎干細(xì)胞ES的生長(zhǎng)并維持ES未分化的狀態(tài)。當(dāng)作為飼養(yǎng)層細(xì)胞時(shí),MEF需經(jīng)絲裂mei素C處理停止生長(zhǎng)。建議作為ES細(xì)胞的飼養(yǎng)層時(shí),MEF不要超過(guò)6代。

l 細(xì)胞特性

 

1) 來(lái)源:小鼠胚胎

2) 形態(tài):成纖維細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用

l 培養(yǎng)條件

1) 準(zhǔn)備D/F12(推薦awcell-0005)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)

 

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式

低溫:(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫: (2) T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

 
在進(jìn)行ESC或iPSC的實(shí)驗(yàn)時(shí),使用MEF作為飼養(yǎng)層是至關(guān)重要的,因?yàn)樗鼈兡軌蚍置谝恍┘?xì)胞因子,如肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β),這些因子有助于抑制干細(xì)胞的分化。此外,MEF細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)過(guò)滅活處理,確保它們不會(huì)增殖并干擾干細(xì)胞的生長(zhǎng)。

  選擇高質(zhì)量的MEF細(xì)胞對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。好的MEF細(xì)胞應(yīng)具備以下特點(diǎn):生長(zhǎng)停滯,確保細(xì)胞已經(jīng)過(guò)滅活處理;具有高復(fù)蘇率,通常大于80%;以及對(duì)ESC/iPSC具有強(qiáng)大的支持能力,這可以通過(guò)觀察干細(xì)胞形態(tài)和檢測(cè)ALP表達(dá)水平來(lái)評(píng)估。

  OriCell®是提供高質(zhì)量MEF細(xì)胞的供應(yīng)商之一,他們的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)預(yù)滅活處理,確保了高復(fù)蘇率和對(duì)ESC/iPSC的良好支撐能力。此外,OriCell®還提供專門針對(duì)MEF細(xì)胞優(yōu)化的培養(yǎng)基,以保證細(xì)胞的高復(fù)蘇和貼壁效率。

  值得注意的是,盡管MEF細(xì)胞在干細(xì)胞研究中非常有用,但它們也可能帶來(lái)一些挑戰(zhàn),例如細(xì)胞老化和污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此,研究人員需要仔細(xì)選擇和處理這些細(xì)胞,以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

 

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