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介紹大鼠心肌原代細胞的處理方法

更新時間:2021-12-24  |  點擊率:3458
  原代心肌細胞培養(yǎng)是體外研究心血管疾病相關(guān)機制的主要手段和基本技術(shù)?;A(chǔ)實驗中,與細胞系相比,原代心肌細胞的形態(tài)及電生理方面更接近在體細胞,因此,培養(yǎng)原代心肌細胞的質(zhì)量直接關(guān)系實驗的進程及結(jié)果。
  心肌細胞培養(yǎng)作為一種體外研究模型,可以更便捷的從細胞和分子水平對其生長、發(fā)育、生理、代謝、病理等進行研究。在許多研究領(lǐng)域原代培養(yǎng)心肌細胞作為一種主要的研究模型,被廣泛應(yīng)用于心血管研究之中。
  介紹大鼠心肌細胞的處理方法:
  1、大鼠的選擇
  新生大鼠鼠齡的選擇新生大鼠心肌細胞在出生后3d內(nèi)具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌細胞則為終末分化細胞,不再具有分裂增殖能力。因此,大鼠出生時間越短,其心肌細胞分離后成活率越高,越容易貼壁生長。大量觀測表明,選擇1~3d齡大鼠分離其心肌細胞進行原代培養(yǎng)較為理想.其中尤以半日齡大鼠心肌細胞培養(yǎng)效果較佳。
  2、最常見的酶消化法
  0.1%的胰蛋白酶重復(fù)消化乳鼠心肌組織多次,收集的細胞用含15%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基混懸后過濾,純化心肌細胞后置CO2培養(yǎng)箱孵育。結(jié)果培養(yǎng)的心肌細胞4~6h后開始貼壁生長,12~24h明顯增殖,3~4d后細胞匯合成片。在倒置顯微鏡下心肌細胞呈圓形,梭形,多角形,伸出偽足,出現(xiàn)自發(fā)性節(jié)律性搏動。結(jié)論應(yīng)用酶消化法可簡便,快速地獲得大量活力高的心肌細胞。
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