小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)RAW264.一般為圓形或橢圓形,小而透亮。因?yàn)槠渚哂休^強(qiáng)的吞噬能力,并在吞噬抗原后釋放趨化因子,促使細(xì)胞分化出偽足,粘附攀爬能力也因此增強(qiáng)。若細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣就會促使細(xì)胞呈現(xiàn)出梭形、長梭形,鏡下觀察就會發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮吻颐娣e變大,不再是具有細(xì)長偽足的類圓形小細(xì)胞。這也是出現(xiàn)消化困難的一個(gè)主要原因。
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)RAW264.7的培養(yǎng)注意事項(xiàng)和要點(diǎn):
1.由于RAW264.7細(xì)胞易有不同形態(tài),傳代時(shí)就會發(fā)現(xiàn)形態(tài)變?yōu)樗笮蔚募?xì)胞很難消化下來,輕敲培養(yǎng)皿細(xì)胞不會脫落,用力吹打又容易對細(xì)胞產(chǎn)生較大損傷,因此要盡量避免細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。即在接種細(xì)胞時(shí)保持一個(gè)適中的傳代密度,避免其向終末細(xì)胞分化,因?yàn)橐坏┘?xì)胞發(fā)生分化變?yōu)殚L形是無法恢復(fù)的,這是培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞時(shí)最需要注意的問題。
2.RAW264.7細(xì)胞喜歡連片生長,正常狀態(tài)下應(yīng)該是一小片一小片的分布在培養(yǎng)皿中,片片之間不相連接,等到長到更多更密的時(shí)才會連成大片,但同時(shí)也會疊加成層,容易出現(xiàn)部分細(xì)胞飄起無法貼壁的問題。所以,要關(guān)注好細(xì)胞的匯合程度,控制好細(xì)胞的生長速度,不能等到疊加成層時(shí)才去傳代。
3.RAW264.7細(xì)胞傳代后貼壁時(shí)間較短,半小時(shí)左右絕大部分細(xì)胞就能夠貼下去,剛貼壁時(shí)細(xì)胞呈圓形,折光度很好,鏡下觀察如小珍珠狀一個(gè)個(gè)地散落于培養(yǎng)皿中。生長一段時(shí)間后,部分細(xì)胞會變成類似四角形,伸出偽足之類的。這個(gè)時(shí)候就是在提醒你注意傳代了,此時(shí)無論匯合度如何都需要進(jìn)行傳代了,因?yàn)樾螒B(tài)發(fā)生改變的細(xì)胞對實(shí)驗(yàn)結(jié)果會產(chǎn)生較大影響,最終造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不理想。
4.在細(xì)胞生長的初始階段,細(xì)胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加,細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度,會有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中,鏡下觀察會同時(shí)出現(xiàn)懸浮和貼壁兩種形態(tài)。
5.該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí),吸走部分培養(yǎng)液,留下少許培養(yǎng)液(例如使用T25培養(yǎng)瓶留下2 ml),用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,充分吹打后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi),混勻后進(jìn)行培養(yǎng)。
6.該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí),細(xì)胞會輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起,有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的,在傳代時(shí)應(yīng)收集起來,離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。
7.血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化,建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。