小鼠成纖維細(xì)胞L929傳代流程的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間：2025-02-19 | 點(diǎn)擊率：1812

　　小鼠成纖維細(xì)胞L929分離自小鼠皮膚組織的貼壁細(xì)胞，成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymalcell)分化而來。功能活躍的細(xì)胞稱為成纖維細(xì)胞。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。纖維細(xì)胞（fibrocyte），結(jié)締組織中數(shù)目最多的細(xì)胞，相對靜止的細(xì)胞稱纖維細(xì)胞。成纖維細(xì)胞數(shù)目最多，胞體大，為多突的紡錘形或星形的扁平細(xì)胞，細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，細(xì)胞輪廓不清，具有突起。其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。纖維細(xì)胞較小，呈多角形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核亦較小，染色較深，電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少，高爾基復(fù)合體不發(fā)達(dá)。

　　小鼠成纖維細(xì)胞L929傳代流程：

　　1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加1~2ml0.25%EDTA的胰酶消化（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?~2min）。

　　2.鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁運(yùn)動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落、吹散。

　　3.取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時(shí)重復(fù)傳代操作或者凍存。

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